4. 用轉(zhuǎn)棒儀測(cè)量動(dòng)物的運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)/平衡

對(duì)于所有試驗(yàn)，在試驗(yàn)前30 min將小鼠帶到實(shí)驗(yàn)室，以確保它們完全清醒。一般來說，為了讓肌肉力量和覺醒水平恢復(fù)到正常，在每次運(yùn)動(dòng)測(cè)試后都放回到籠子里，讓小鼠休息。

4.1 加速旋轉(zhuǎn)版本測(cè)試

1)捏住小鼠尾巴后1/3處，將小鼠放在靜止的旋轉(zhuǎn)桿上，背向桿旋轉(zhuǎn)的方向，每個(gè)通道里都放一只小鼠。

2)啟動(dòng)轉(zhuǎn)棒，并同時(shí)開始自動(dòng)計(jì)時(shí)。一般加速度設(shè)置為20 rpm/min。

3)當(dāng)小鼠從旋轉(zhuǎn)桿上掉下來時(shí)，如果可能的話，及時(shí)將它從設(shè)備里取出，然后放回籠子里。

4)在5 min結(jié)束時(shí)，將所有仍然保持在桿上的小鼠移到飼養(yǎng)籠里。

5)記錄小鼠從旋轉(zhuǎn)桿上跌落下來的潛伏期（小鼠停留在旋轉(zhuǎn)桿上的時(shí)間），如果它們成功完成了整個(gè)測(cè)試周期，則記錄*大分?jǐn)?shù)300秒。

6)通常，理想的方法是進(jìn)行多次試驗(yàn)，重復(fù)試驗(yàn)兩到三次，每次至少間隔15 min。

7)計(jì)算出這些試驗(yàn)得分的平均值。這是一種典型的方法，但如果對(duì)每個(gè)單獨(dú)試驗(yàn)的表現(xiàn)都很感興趣，也可以使用原始形式的數(shù)據(jù)。

8)采用非配對(duì)t檢驗(yàn)分析兩組動(dòng)物在單個(gè)試驗(yàn)數(shù)據(jù)或平均試驗(yàn)的單個(gè)數(shù)據(jù)集的差異。

9)如果對(duì)一系列試驗(yàn)的表現(xiàn)感興趣，則需要進(jìn)行多因素方差分析（ANOVA），包括一個(gè)受試者內(nèi)因素（試驗(yàn)次數(shù)、**劑量或重復(fù)測(cè)量設(shè)計(jì)中的其他測(cè)試條件）和任何受試者間因素（例如，腦區(qū)損毀、基因型或小鼠之間不同的**）。對(duì)于縱向研究，將增加一個(gè)額外的受試者內(nèi)因素（時(shí)間點(diǎn)或年齡）。

4.2 定速旋轉(zhuǎn)版本測(cè)試

1)將旋轉(zhuǎn)桿的速度設(shè)置在所需的*低速度。

2)將小鼠放在旋轉(zhuǎn)桿上，每個(gè)通道里都放上一只小鼠。

3)啟動(dòng)轉(zhuǎn)棒，并同時(shí)開始自動(dòng)計(jì)時(shí)，測(cè)試時(shí)間*長(zhǎng)1min。

4)當(dāng)小鼠從旋轉(zhuǎn)桿上掉下來時(shí)，如果可能的話，及時(shí)將它從設(shè)備里取出，然后放回籠子里。

5)當(dāng)所有小鼠完成1 min的試驗(yàn)后，移出它們，然后放回到飼養(yǎng)籠里。

6)記錄下小鼠能夠保持在旋轉(zhuǎn)桿上的潛伏期時(shí)間。

7)每個(gè)試驗(yàn)之間至少間隔5 min。

8)將設(shè)備重置到下一個(gè)要使用的速度。

9)重復(fù)步驟2）至8），直到對(duì)所有所需的旋轉(zhuǎn)桿速度進(jìn)行完試驗(yàn)為止。

10)通常需要進(jìn)行多次試驗(yàn)。在*小間隔15 min后，以新的上升速度系列重復(fù)測(cè)試。

11)計(jì)算這些試驗(yàn)得分的平均值。這是一種典型的方法，但如果每個(gè)試驗(yàn)的表現(xiàn)都感興趣，請(qǐng)使用原始形式的數(shù)據(jù)。

12)如果只使用單個(gè)速度來確定兩組小鼠之間的差異，則應(yīng)用非配對(duì)t檢驗(yàn)。對(duì)于多個(gè)速度，應(yīng)用至少一個(gè)受試者內(nèi)部因素（桿速度）和通常至少一個(gè)受試者間因素（例如，基因型或損毀組）的方差分析。

13)**或其他**將在分析中提供第三個(gè)處理因素，受試者內(nèi)因素或受試者間因素取決于采用的是重復(fù)測(cè)量還是隨機(jī)設(shè)計(jì)。對(duì)于縱向研究，還需要**個(gè)受試者內(nèi)變量（時(shí)間點(diǎn)）。

數(shù)據(jù)收集和評(píng)價(jià)指標(biāo)

大多數(shù)方案要么測(cè)試動(dòng)物在給定的時(shí)間內(nèi)停留的*大速度，要么測(cè)試動(dòng)物在不同速度下跌落所需的時(shí)間。商業(yè)轉(zhuǎn)棒儀可以自動(dòng)記錄動(dòng)物的跌落潛伏期（動(dòng)物保持在桿上的時(shí)間）和跌落時(shí)的旋轉(zhuǎn)速度，這是動(dòng)物運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)性的主要指標(biāo)，尤其是前者。同時(shí)還能記錄試驗(yàn)結(jié)束的原因，跌落、跳躍或被動(dòng)旋轉(zhuǎn)。一些研究也應(yīng)用了額外的或替代的指標(biāo)，例如運(yùn)動(dòng)的距離，在規(guī)定的持續(xù)時(shí)間內(nèi)在旋轉(zhuǎn)桿上保持平衡的動(dòng)物數(shù)量，或在實(shí)驗(yàn)運(yùn)行期間從旋轉(zhuǎn)桿上跌落和動(dòng)物抓住桿被動(dòng)旋轉(zhuǎn)的次數(shù)。另外，可以以日期為橫坐標(biāo)，潛伏期為縱坐標(biāo)繪制初始實(shí)驗(yàn)期間的任務(wù)學(xué)習(xí)曲線，通常隨著每日訓(xùn)練任務(wù)表現(xiàn)顯著提高。

數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

根據(jù)研究人員的經(jīng)驗(yàn)，在轉(zhuǎn)棒測(cè)試中，大約8只動(dòng)物的樣本量就能提供足夠的能力來檢測(cè)組平均值中10%到15%的差異。對(duì)于方差的統(tǒng)計(jì)同質(zhì)性，小鼠的數(shù)量至少不應(yīng)低于6只。

根據(jù)需要對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析，在適當(dāng)?shù)那闆r下，使用組間重復(fù)測(cè)量比較。對(duì)于事后分析，Tukey HSD測(cè)試用于確定組之間的成對(duì)差異，Dunnetts測(cè)試用于確定給定數(shù)據(jù)集與該數(shù)據(jù)集的控制值之間的顯著差異。當(dāng)存在顯著的相互作用時(shí)，使用Sidak檢驗(yàn)在組間進(jìn)行一系列獨(dú)立的事后兩兩比較。差異在P ＜0.05時(shí)被認(rèn)為是顯著的。數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示。

注意事項(xiàng)

1.小鼠五到八只為一籠，飼養(yǎng)在溫度，濕度和光受控的環(huán)境中。保持12小時(shí)光/暗循環(huán)，早上8點(diǎn)亮燈。飼養(yǎng)室和實(shí)驗(yàn)室的溫度保持在20 ± 2°C, 相對(duì)濕度為60%。除非在實(shí)驗(yàn)過程中，平時(shí)小鼠可以隨意獲得食物和水。盡一切努力盡量減少動(dòng)物的數(shù)量及其痛苦。

2.在行為測(cè)試之前，撫摩大鼠和小鼠是很重要的（所有組中的所有動(dòng)物都以相同的方式撫摩到相同的程度）。這將使動(dòng)物克服會(huì)對(duì)表現(xiàn)產(chǎn)生重大影響的自然恐懼和焦慮反應(yīng)。

3.在測(cè)試開始之前，將動(dòng)物送至行為測(cè)試室，讓它們不受干擾地適應(yīng)30分鐘，然后稱重并記錄。測(cè)試可以在上午8點(diǎn)至下午4點(diǎn)之間進(jìn)行，重要是是保持不同測(cè)試日的測(cè)試時(shí)間點(diǎn)一致。

4.不同小鼠品系獲得穩(wěn)定的基線表現(xiàn)水平所需的訓(xùn)練量有所不同，但長(zhǎng)時(shí)間暴露于逐漸增加的旋轉(zhuǎn)速度的一般原則是適用的。在訓(xùn)練過程中，如果該方案對(duì)所使用的特定小鼠品系來說太累，可能有必要允許小鼠休息，休息15分鐘通常是足夠的。

5.所需的試驗(yàn)次數(shù)可能因使用的小鼠品系而有所不同。在腦區(qū)損毀或遺傳性**模型的小鼠中，建議進(jìn)行一次以上的試驗(yàn)，因?yàn)閱蝹€(gè)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的分?jǐn)?shù)通常有更大的差異。類似地，在縱向研究中，如果小鼠有一段時(shí)間沒有進(jìn)行過測(cè)試了，**次試驗(yàn)可以作為提醒，在這種情況下，可能需要3次或4次試驗(yàn)，可采用后2次或3次數(shù)據(jù)的數(shù)據(jù)分析。

6.實(shí)驗(yàn)時(shí)轉(zhuǎn)棒速度的設(shè)計(jì)應(yīng)考慮到**的嚴(yán)重程度。應(yīng)該至少有一個(gè)較慢的速度，使大多數(shù)小鼠能夠保持在旋轉(zhuǎn)桿上。理想情況下，后續(xù)的速度應(yīng)該產(chǎn)生一個(gè)代表**或其他處理因素（如給藥測(cè)試）嚴(yán)重程度的數(shù)據(jù)曲線。無法進(jìn)行任務(wù)的比例應(yīng)低于10%。隨著動(dòng)物在**的后期變得更加虛弱，這種情況可能會(huì)增加。

7.*好在開始研究之前選擇重新測(cè)試的頻率。例如，如果正在研究一種測(cè)試化合物的短期影響，那么一次測(cè)試可能就足夠了。然而，如果正在調(diào)查復(fù)合**、損毀或其他**的長(zhǎng)期影響，或者如果確定慢性表型，*好在幾周內(nèi)每周進(jìn)行重新測(cè)試，或連續(xù)幾個(gè)月每月進(jìn)行重新測(cè)試。因此，在開始主要研究之前，通常需要進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)來確定適當(dāng)?shù)膶?shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、測(cè)試頻率、發(fā)病年齡和表型持續(xù)時(shí)間。

8.一定要在每只被測(cè)試小鼠之間對(duì)設(shè)備進(jìn)行清潔和**。小鼠經(jīng)常在旋轉(zhuǎn)桿上小便和排便。桿子上的尿液和糞便會(huì)損害其他測(cè)試小鼠的表現(xiàn)。因此，經(jīng)常清洗儀器是很重要的。

9.實(shí)驗(yàn)室環(huán)境在測(cè)試期間應(yīng)保持溫度、濕度和光強(qiáng)度不變。

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