觀察運(yùn)用電針**對(duì)阿爾茨海默病模型大鼠行為學(xué)影響的實(shí)驗(yàn)研究
觀察運(yùn)用電針**對(duì)阿爾茨海默病模型大鼠行為學(xué)影響的實(shí)驗(yàn)研究
【摘要】 目的 通過針刺的方法**阿爾茨海默病模型大鼠，觀察對(duì)其學(xué)習(xí)和記憶的改善效果。方法 通過給大鼠灌服D-半乳糖制劑，造成大鼠阿爾茨海默病模型。分別設(shè)立正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、**對(duì)照組、普通針刺對(duì)照組、電針對(duì)照組。正常對(duì)照組、模型對(duì)照組只給予相同劑量的生理鹽水灌服，**對(duì)照組給予哈伯因混懸液灌服**，普通針刺組采用針刺“百會(huì)”、“神庭”、“腎俞”、“太溪”、“足三里”的方法進(jìn)行**，電針組采用針刺“百會(huì)”、“神庭”、“腎俞”、“太溪”、“足三里”穴，并在些基礎(chǔ)上聯(lián)接電針進(jìn)行**。以10d為1個(gè)療程，共**3個(gè)療程。通過大鼠跳臺(tái)試驗(yàn)來檢測(cè)大鼠的學(xué)習(xí)和記憶能力，并對(duì)大鼠大腦海馬CAI區(qū)的tau蛋白含量進(jìn)行觀察。結(jié)果 造模后，正常對(duì)照組大鼠的記憶逃避潛伏期時(shí)間明顯少于模型對(duì)照組(P <0.05)，**結(jié)束后**對(duì)照組、普通針刺組、電針組的逃避潛伏時(shí)間短于模型對(duì)照組(P <0.05)。電針組的療效優(yōu)于普通針刺組和**對(duì)照組(P <0.05)。而**后，海馬CAI區(qū)的 P-tau蛋白表達(dá)**組都低于模型組，且電針組的效果要優(yōu)于**對(duì)照組和普通針刺組(P <0.05)。
【關(guān)鍵詞】 針刺；阿爾茨海默病；記憶能力
隨著年齡的增大，老年人中癡呆的發(fā)生率逐漸增高，其中以阿爾茨海默病(又叫老年性癡呆)*為多見。這是一種**神經(jīng)系統(tǒng)(大腦)神經(jīng)細(xì)胞的脫髓鞘式退變。臨床上主要表現(xiàn)為記憶能力、判斷能力、學(xué)習(xí)能力以及行動(dòng)能力、生活自理能力普遍下降，給患者生活質(zhì)量和家庭生活都帶來了不利的影響。而目前尚未有特效**和**方法問世，而中醫(yī)的針灸**在臨床上卻收到了較為明顯的改善效果。而其中的作用機(jī)理卻未被揭示，本文從神經(jīng)行為學(xué)和組織化學(xué)的層面作了觀察，期望為針刺**該病的機(jī)理提供佐證。
1 材料與方法
1.1 材料
1.1.1 主要器材：采用由上海欣軟信息科技有限公司生產(chǎn)的Morris水迷宮，為改良型水迷宮，其跳臺(tái)可以定時(shí)出現(xiàn)。由日本株式會(huì)社生產(chǎn)的B50型天平，由美國(guó)Sigma生物技術(shù)有限公司提供的測(cè)試AD P-tau蛋白的原位原位雜交試劑盒，中國(guó)江蘇華佗醫(yī)療設(shè)備廠出產(chǎn)的“長(zhǎng)城牌”電針儀。
1.1.2 主要應(yīng)用試劑：誘發(fā)AD模型所用D-半乳糖由北京貝瑞和康生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)，**對(duì)照組所用**為河南竹林眾生制藥有限公司生產(chǎn)的哈伯因懸服液。
1.2 動(dòng)物篩選
將所有購(gòu)自黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心的Wistar大鼠放入水迷宮中，進(jìn)行適應(yīng)性的游泳訓(xùn)練，記錄其游泳距離，學(xué)習(xí)逃避潛伏期和學(xué)習(xí)錯(cuò)誤次數(shù)，訓(xùn)練1周。然后將游泳能力障礙，學(xué)習(xí)記憶能力先天不足的大鼠予以淘汰，*后選取符合實(shí)驗(yàn)條件的50只大鼠進(jìn)入*后實(shí)驗(yàn)程序。
1.3 模型制備方法
將準(zhǔn)備造模的大鼠放入相同環(huán)境中進(jìn)行適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，保持充足的光線、水分和食物。然后按每只大鼠200mg/kg體重的劑量向齊腹部注射D-半乳糖，1次/d注射，共持續(xù)6周時(shí)間。然后將所有造模大鼠編號(hào)，按隨機(jī)原則分為模型對(duì)照組10只、**對(duì)照組10只、普通針刺**組10只、電針組10只。取正常大鼠10只作為正常對(duì)照組。
1.4 **方法
**開始后，正常對(duì)照組、模型對(duì)照組均給予每日捆綁30min，并灌服與**對(duì)照組灌服**相同量的生理鹽水；**對(duì)照組則每日灌服哈伯因懸服液2ml(17μg)；普通針刺組則用“華佗牌”30號(hào)針灸針針刺大鼠“百會(huì)”、“神庭”、“腎俞”、“太溪”、“后三里”穴，得氣后行針2min，留針30min；電針組則在普通針刺組的基礎(chǔ)上加用“長(zhǎng)城牌”電針儀，采用疏密波刺激以上穴位，時(shí)間30min。“百會(huì)”穴在頭頂正中線中點(diǎn)頭骨中央；“神庭”穴在頭頂正中線前端；“腎俞”穴在后正中線上，于**腰椎棘突下旁開一寸；“太溪”穴在后肢踝部外側(cè)后方凹陷處；“后三里”在大鼠后肢膝部外側(cè)前下方。所有大鼠**時(shí)間為6周，**1次/d。
1.5 測(cè)試和取材觀察方法
跳臺(tái)試驗(yàn)。Morris水迷宮的游泳池中有一塊橡膠平臺(tái)，離水面有1cm。將大鼠放入水池中開始記時(shí)，當(dāng)大鼠通過游泳尋找到水下的平臺(tái)時(shí)記為學(xué)習(xí)逃避潛伏期。24h后再重復(fù)以上試驗(yàn)，第2次所需時(shí)間為記憶逃避潛伏期。以此作為大鼠的學(xué)習(xí)和記憶能力的反應(yīng)指標(biāo)。分別在造模前第1周、**前第7周、**后第13周3個(gè)時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行大鼠學(xué)習(xí)逃避潛伏期、記憶逃避潛伏期的測(cè)試。水迷宮試驗(yàn)結(jié)束后，將大鼠進(jìn)行麻醉，接著通過腦過量灌注致其死亡。將大鼠頭骨切開取出大鼠組織，放入深度為4%的1/1000 DEPC溶液中保存，再使用多聚甲醛予以固定待檢。將固定的腦組織由額極向枕極順序平均分成五份，取出第2份腦組織放入24℃的水中用酒精進(jìn)行梯度脫水處理。其順序是70%乙醇→80%乙醇→95%乙醇→100%乙醇一度→100%乙醇二度→100%乙醇三度，然后染色切片并用二甲苯使組織透明。用AD P-tau蛋白原位雜交試劑盒進(jìn)行tau 蛋白過度磷酸化陽性檢測(cè)。細(xì)胞中出現(xiàn)的棕黃色顆粒者即為過度磷酸化tau蛋白表達(dá)。*后對(duì)tau蛋白陽性表達(dá)數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。
1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
用電子計(jì)算機(jī)編輯圖像和表格。所有數(shù)據(jù)用SPSS13.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。計(jì)量資料的表示方式為平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差，用方差來分析組與組之間的均數(shù)對(duì)比，以P <0.05為衡量標(biāo)準(zhǔn)。在對(duì)陽性細(xì)胞數(shù)的觀察時(shí)每個(gè)載玻片取3個(gè)視野，計(jì)取其平均顆粒數(shù)。
2、討論
許多研究都充分地證實(shí)，人對(duì)空間結(jié)構(gòu)的學(xué)習(xí)能力和記憶能力更多的建立在大腦組織 中的海馬神經(jīng)元，而阿爾茨海默癥則是對(duì)該區(qū)的腦組織造成持續(xù)性的神經(jīng)細(xì)胞的退行性改變而使空間學(xué)習(xí)和記憶能力下降。學(xué)習(xí)和記憶能力作為癡呆患者智力指標(biāo)的重要考查要點(diǎn)，具有金指標(biāo)的指示地位，所以在實(shí)驗(yàn)中我們把大鼠的學(xué)習(xí)、記憶逃避潛伏期作為觀察指標(biāo)。以上結(jié)果清楚表明，經(jīng)過腹腔灌服D-半乳糖后，AD模型大鼠的空間學(xué)習(xí)和記憶能力已經(jīng)是明顯地退化了，說明D-半乳糖的吸收可以造成大鼠大腦細(xì)胞退行性改變，tau蛋白等負(fù)面物質(zhì)的產(chǎn)生，使大腦功能退化。然而通過針刺后，大鼠在水迷宮的表現(xiàn)令人欣慰，雖然在**的6周期間，大鼠的腦細(xì)胞仍然處于退變狀態(tài)，但潛伏時(shí)間并沒有下降得很快，甚至電針組還有所提升。實(shí)驗(yàn)證實(shí)，針刺**能夠和西藥一樣起到改善腦部功能的作用。經(jīng)過**，大鼠在學(xué)習(xí)和記憶能力都較**前有回升。當(dāng)然，由于AD不僅是功能，也有一部分器質(zhì)上的改變，所以針刺只能在一定范圍內(nèi)起到**恢復(fù)的作用，而不能使AD大鼠的記憶功能完全恢復(fù)；但是實(shí)驗(yàn)也顯示，針刺配合電針相對(duì)于普通針刺更有效果，說明如果對(duì)針刺手法和方式進(jìn)行改進(jìn)，能夠進(jìn)一步擴(kuò)大療效，使**后效果無限接近于正常。從生物化學(xué)層面分析，tau蛋白過量產(chǎn)生，對(duì)腦功能是一種負(fù)面影響，而西藥組和針刺組都不同程度的達(dá)到抑制該蛋白產(chǎn)生的目的。而電針更是有效地降低了tau蛋白的表達(dá)率，一則說明了tau的確對(duì)大鼠記憶系統(tǒng)造成紊亂，另一方面也提示如果能降低tau蛋白的表達(dá)，那么就能一定程度地改善大腦功能。
